Importancia de los Fluidos Seminales en la Escena del delito y su Investigación

 
 

Basado en el Tratado de Criminalística Tomo II de la Policía Federal Argentina

Editado por Malena González de León

 
 

El estudio de los Fluidos Seminales en la Escena del Crimen se encuentra directamente ligado a los Crímenes de Índole Sexual y serán de vital importancia al momento de realizar la reconstrucción del hecho y el establecimiento de identidad del agresor o agresores.

El Semen es la sustancia que segregan los órganos reproductores masculinos y en la cual se encuentran los espermatozoides.

 

Donde puede ser encontrado:

Manchas en vestimenta, sábanas, almohadas, camisones, muebles, alfombras, pisos, vehículos, tapizados de automóviles, etc.

El semen antes de secarse, posee un olor alcalino característico, y contiene millones de espermatozoides. Al secarse, la mancha pierde su olor, los espermatozoides mueren, adquiere un color blanco grisáceo, y a veces amarillento, e imparte a las telas un efecto almidonado.

 

Qué se estudia en el Semen: ( en este informe solo se desarrollará el primer punto)

  • Si de hecho es semen
  • Si de serlo es o no humano
  • Muchas veces el grupo sanguíneo
  • Si hubo eyaculación interna o externa
  • Si el agresor había consumido drogas

Composición del Semen:

El semen es un líquido de aspecto lechoso, opalescente, ligeramente amarillo. Posee un ph de 7.2-7.3 y esta compuesto por el plasma seminal y los espermatozoides que pueden ser separados por centrigufación .

Componentes no proteicos:

Cloruro de Na

200 mg%

Dióxido de Carbono

50 ml%

Fósforo inorgánico

40-50 mg%

Fósforo Ácido soluble

95 mg%

Fósforo de la espermina

15-30 mg%

Calcio

24-25 mg%

Glucosa

200-300 mg%

Urea

72 mg%

Ácido Láctico

90-100 mg%

Colesterol

80 mg%

Entre las sustancias fosforadas se encuentra el difosfato de espermita que responde a la formula general:

                     C10-H26-N4-H3 · 2 PO4H3 · 6 H20

El semen humano contiene 112-268 mg% de fosfato de espermita y junto a esta, se encuentra otra base en el semen, la espermidina , que es producto parcial de la hidrólisis de la espermina .

NH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-CH2-NH2

El plasma seminal esta compuesto también por proteínas y enzimas. Pequeñas cantidades de globulinas, albúmina, nucleoproteína, proteasas no coagulables; y una amilasa de ph 6-7, una tromboquinasa , coagulasa , licuasa , fosfatasa ácida (de gran valor pericial), fosfatasa alcalina, fibrinolisina y fibrinogenasa .

NO contiene hormonas sexuales y si contiene colina.

La Colina, presente en todas las células, es una base orgánica constitutiva de la lecitina. Interviene en el transporte de los lípidos y en su metabolismo formando los fosfolípidos .

 

CH2OH

CH2

HO-- NCH3

CH3

CH3

( hidroxido de trimetil - hidroxietil amonio)

La fructosa es la responsable de la movilidad de los espermatozoides, ya que sin ella permanecen inmóviles.   La   misma se forma a partir de la glucosa sanguínea y para ello es necesaria la testosterona (hormona masculina). “lo prueba el hecho que la fructosa desaparece por castración de animales, y reaparece si se suministra a éstos dicha hormona…Mas aún: dada la relación existente entre la hipófisis y las glándulas sexuales y la recién mencionada, de las glándulas sexuales con la formación de fructosa, la concentración de este glúcido en el semen depende del funcionamiento hipofisiario ”.

La eyaculación normal consta de 1.5 a 6 ml de fluido, y las anormalidades son la hipospermia (volumen inferior a 1.5ml) y aspermia (falta de semen).

Es importante tener en cuenta que el esperma es producto de tres porciones distintas del sistema genital y sus composiciones son diferentes. La primera proviene de las glándulas de Cowper , de ph 8.4 que neutraliza la acidez de la uretra. La fracción prostática y por último los espermatozoides junto con el líquido segregado por las vesículas seminales.

Los espermatozoides:

Son células móviles constituidas por una cabeza, cuello, cuerpo y cola con una longitud que varía de las 50 a 70 micras

Se calcula que en el producto normal de una eyaculación se encuentran alrededor de 60.000.000 de espermatozoides por ml de semen.   Y sus acepciones son la oligozoospermia (menor cantidad) y azoospermia (falta de espermatozoides).

La cabeza del espermatozoide es ovalalada piriforme y representa alrededor del 10% del total del largo. En la misma se distinguen una parte anterior ( acrosoma ) y otra posterior (núcleo) y se encuentra cubierta por una tenue membrana, la galea capitis .

Transporte y Cuidado de las manchas como evidencia:

Dado que los estudios de semen se realizan principalmente en base a la presencia de espermatozoides, es de cabal importancia el proteger las prendas que contengan a los mismos. Muchos expertos consideran que la presencia de un espermatozoide completo es la única prueba irrefutable de la presencia de semen. Por esta razón, los artículos deberán manejarse con mucho cuidado, no deberá doblarse ni enrollarse la parte manchada y definitivamente no deberá someterse a fricción.

 

Estudios   que se realizan en el semen.

Existen para la investigación de las manchas seminales una cierta variedad de estudios que a continuación serán desarrollados. Es importante destacar que para muchos laboratorios periciales, la única prueba irrefutable de presencia de semen en la muestra es la observación microscópica de un espermatozoide completo. Por esta razón se mencionaran una serie de análisis recordando que en su mayoría son únicamente de carácter Preliminar.  

 

1. Métodos Físicos: Examen UV

 

Los métodos físicos consisten en la exposición de la mancha ala radiación ultravioleta, la cual inducirá una fluorescencia característica con una intensidad máxima de cerca de 4200mu. De todas formas, el gran problema que presenta la fluorescencia es que no es específica del semen, sino que producirá la misma reacción con otros fluidos biológicos.

Esta técnica es de utilidad principalmente para el estudio de grandes superficies donde se sospecha que ha habido un delito de índole sexual y no ha podido ser determinado el sitio donde presuntamente se encontrarían las manchas. Estas ultimas fluorescerán sobre fondos no fluorescentes,   por lo que en algunos casos donde las prendas contienen fibras de blancos ópticos, se obtiene el efecto inverso donde las manchas fluorescerán con menor intensidad al resto de la tela.

Los autores A. R. Calloway y sus colaboradores aconsejan la siguiente aplicación de luces para el análisis de las manchas:

  • Examen directo con luz ultravioleta de longitud de onda 254nm a temperatura ambiente. Aquí se deberían observar bien salvando sobre tejitos fluorescentes.
  • Examen directo con luz de longitud de onda 365nm que en general es poco efectiva.
  • Examen a lux UV previa refrigeración (nitrógeno a temperatura de ebullición, -195 ºC ) ,pero la observación será satisfactoria si el material es colocado dentro de un bloque de hielo seco. Las manchas de semen presentaran una fosforescencia qie persistirá por 20 segundos luego de retirada la fuente UV.

 

2. Métodos Cristalográficos: La Reacción de Florence

Este método se basa en la formación de cristales de yoduro de colina, la cual se encuentra presente en el esperma en forma de fosforil -colina y lecitina.

El reactivo de Florence se constituye de 2.54 gr. de Iodo metálico, 1.56 gr. de Ioduro de potasio y 30 mililitros de agua destilada.

Si la mancha se encuentra en una superficie dura se procederá a rasparla y colocar los residuos en el portaobjetos. Si por el contrario la mancha está en una sup. Blanda, la misma se extraerá con la ayuda de agua destila, colocandolo en un porta objetos y secando a Baño Maria. Se colocará un cubreobjetos y una o dos gotas del reactivo de florence , para que por capilaridad corra entre el porta y el cubre. Se lo deja en reposo por no mas de 20 minutos, para que los cristales no se disuelvan, y se observa al microscopio.

Los cristales de Ioduro de Colina son láminas romboidales de color pardo.

Deber recordarse que, como mencionado anteriormente, la colina no es exclusiva del semen, pero resultará de gran importancia en el análisis de muestras de esperma aspérmicas , principalmente porque no se conocen otros fluidos que registren simultáneamente una alta presencia de colina junto con fosfatasa ácida como en el esperma.

 

3. Métodos Microscópicos

Como   fue destacado anteriormente, la presencia de un espermatozoide completa es la prueba innegable de semen como parte constitutiva de la mancha.

Si la mancha se encuentra todavía húmeda, o por lo menos es de reciente data, por lo general esta determinación no será muy compleja, pero puede complicarse con el paso sucesivo del tiempo, la contaminación adquirida y la superficie en la que se encuentra la muestra.

Es   muy común que en las muestras puedan detectarse parciales de espermatozoides, ya sean cabeza   o cola, pero debido a la contaminación con la que generalmente se encuentran estos restos, muchas veces estas células pueden ser confundidas con esporas y bacterias. Y no debe olvidarse también el caso de los sujetos azoospérimicos , en los que no habrá secreción de espermatozoides en lo absoluto.  

Del libro “Tratado de Criminalística Tomo II” de la Policía Federal Argentina citaremos las técnicas recomendadas para la mejor observación de estas células.

•  En un tubo de colocará una pequeña fracción de   la zona maculada cubierta con la menor cantidad posible de agua destilada y se colocará en una centrífuga.

•  Se centrifugará por 5 minutos y   a continuación se retirará el trozo de genero soporte escurriéndolo cono una varilla de extremo plano.

•  Se centrifugará a 1200 rpm por 5 minutos

•  Decantar el liquido sobrenadante y agitar enérgicamente el residuo sólido del fondo del tubo

•  Finalmente se tomara una gota del residuo y poniéndolo en porta objetos y cubriéndolo ose observará a l microscopio.

Una alternativa a la centrifugación es la colocación de la tela con la mancha hacia abajo sobre un vidrio de reloj.   Luego de agregar unas gotas de agua destilada, el vidrio se cubrirá con un cristalizador con un tiempo dependiente de la antigüedad de la mancha. Para un manchar de varias horas se recomiendan 30 minutos. Luego, se tomara el soporte con una pinza y transferirá el contenido a un portaobjeto por contacto.  

Para los casos en lo que hay contaminación sanguínea, se recomienda utilizar una solución de saponina en el preparado, la cual alisara los hematíes.

Un dato importante es la supervivencia que presentan los espermatozoides en fluido vaginal, en el que fueron encontrados inmóviles hasta 100 días después de ser eyaculados.

Para la coloración de los preparados se recomienda la técnica de May- Grünwald , May- Grünwald - Giemsa , azul de Loeffler , Hematoxilina-eosina, etc.

 

4. Métodos Cromatograficos : TLC

Los métodos de cromatografía en capa delgada son utilizados principalmente cuando no es posible visualizar un espermatozoide completo. En este caso se tomara como determinante la negativa y como orientativa la reacción positiva.

En la cromatografía se analizaran las bases nitrogenadas colina y espermita y la enzima fosfatasa ácida.

Aquí describiremos la técnica desarrollada por D. Hessel y F. Medgalin :

•  Para la toma de muestra se recomienda cortar 1cm2 del soporte y centrifugarlo con 0.5 ml de solución 1 N de ác clorhídrico. Si la muestra es producto de un raspado, se tomara la cantidad encontrada en 1 cm2 y se procederá de la misma manera.

•  Agitar bien para la disolución y salificacion de las bases y centrifugar.

•  Sembrar 20ul del extracto y 10ul de semen testigo. De poseerlas, es recomendable sembrar 10ul de colina y 10 de espermita.

•  La corrida se realizará en clorhídrico 1N.

•  Cubrir adecuadamente el tercio superior de la zona de la corrida cromatográfica y revelar el resto con el reactivo de Dragendorff :

Solución A:

Subnitratote bismuto = 850 mg

Ácido Acético = 10 ml

Agua destilada = 40 ml

 

Solucion B

Ioduro de postasio = 40 gr

Agua destilada = 100 ml

 

Se mezclan 5 ml de la solución A con 5 ml de la solución B en 100 ml de agua en que se habrán disuelto 20 ml de ácido acético glacial.

•  Resultado positivo de colina: rosado de Rf :0.5

•  Cubrir la zona revelada y utilizar ahora Iodoplatinico , que en caso de espermita positiva dará color púrpura con relación de frentes 0.85

Yodo Platinico :

Cloruro de platino al 10% p/v = 1 ml

Ioduro de potasio al 4% p/v = 25 ml

Agua destilada c.s.p = 100ml

Standards :

Colina: 10 mg de clorhidrato de colina + 10 ml de agua destilada

Espermita: 1 mg de tetraclorhidrato de espermita + 1 ml de agua destilada

Semen: 1ml de semen humano fresco + 4 ml de ClH 1 N

 

  5. Métodos Electroforéticos

Este es un método bidimensional que se realiza sobre papel combinando métodos electroforéticos con cromatográficos que permite la separación de la espermina   de los aminoácidos del semen.

Primero se realiza la resolución electroforética en una solución de piridina-ácido acético-agua ph 3.9 (3:10:488)

Luego se realiza la corrida cromatográfica en papel con un líquido resolutivo compuesto der n butranol -ácido acético-agua (12:3:5) y el revelado con una solución acetónica de nihidrina al 0.25% con calentamiento a estufa de 80 ºC luego de la aspersión.

La desventaja que presenta este método es que no analizaría simultáneamente la colina, para lo que se debería realizar otra corrida electroforética con igual solvente y testigos de colina y espermina . Revelando con el reactivo de Dragendorff como fue explicado anteriormente.

El punto interesante en esta técnica es la constancia numérica de 11 aminoácidos entre los cuales esta la presencia cuantitativa de la ornitina , que debe provenir de la arginina , ya que la ornitina no es proteíno -genética.

Un método electroforético para la identificación de la fosfatasa ácida consiste en la investigación de esta banda con el fosfato de 4- metil umbeliferol que se agrega sobre la placa en un papel impregnado con el reactivo en solución buffer de ph 3.

La fosfatasa ácida catalizará la hidrólisis liberando la metil umbeliferota, que es fuertemente fluorescente en azul pálido. A diferencia de otras fosfatasas ácidas, la prostática presenta mayor movilidad y actividad, por lo que su fluorescencia será muy superior a las demás. En el caso de la sanguínea, gracias a la composición de la archilamida se provoca la inhibición de la fosfatasa eritrocitaria .

 

6. Métodos Enzimáticos sobre la Fosfatasa Ácida:

Fosfatasa ácida es cualquier enzima capaz de hidrolizar un fosfato orgánico en medio ácido. La proporción de esta enzima encontrada en el esperma no es comparable con la encontrada en ninguna otro fluido biologico . La fosfatasa ácida prostática produce la hidrólisis de la fosforil colina en ácido fosfórico y colina.   Esta enzima actúa entre un ph 4.5 – 5.

El método práctico para medir la cantidad de fosfatasa ácida fue derivado del trabajo de King y Armstrong quienes encontraron que el cálculo de la cantidad de fenol liberado por un subestrato de disodio - fenil -fosfato proporciona una medida fehaciente del grado de hidrólisis del subestrato producido por la fosfatasa .

Los valores de esta enzima en fluido seminal se expresarán en valores King - Armstrong y deberán ser superiores a 30 unidades.

                                                                      

“Tratado de Criminalística – Tomo II – La química Analítica en la Investigación del Delito”   - cap V, pag 271.

 
 

VOLVER AL MENU PRINCIPAL / VOLVER AL MENU DE TOXICOLOGIA FORENSE